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一文看懂什么是逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝服務(wù)

發(fā)布日期: 2021-12-24
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   相信有很多小伙伴會好奇逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝服務(wù)是用來干嘛的呢?下面跟著小編一起去看看吧!病毒載體是人為調(diào)節(jié)細胞內(nèi)或機體內(nèi)基因表達常用的方式之一,通過病毒感染的方式可以將外源的基因片段穩(wěn)定整合到宿主細胞基因組內(nèi),從而達到持續(xù)、穩(wěn)定的表達外源基因的目的。
  
  什么是逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝服務(wù)
  10cm大皿接種5×106個Plat-E細胞,加入10ml含10%FBS的DMEM培養(yǎng)基過夜,12h后顯微鏡下觀察細胞密度80%-90%為宜。15ug目的質(zhì)粒和500ulOpti-MEM培養(yǎng)基混合,同時45ug轉(zhuǎn)染試劑和500ulOpti-MEM培養(yǎng)基混合,5min后轉(zhuǎn)染試劑Opti-MEM加至質(zhì)粒Opti-MEM中,靜置20min,將混合物滴入Plat-E細胞中混勻,37℃5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),8-10h后更換新鮮DMEM培養(yǎng)基。轉(zhuǎn)染48h,72h后收集病毒上清,0.44um濾器過濾-80℃保存。
  
  慢病毒(Lentivirus)是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種,它能夠?qū)谢驅(qū)氲揭恍┹^難轉(zhuǎn)染的細胞,如原代細胞等,并且將靶基因隨機整合到宿主的基因組中,從而大大增加了轉(zhuǎn)染效率,并且能夠在細胞系中穩(wěn)定表達若干代,可以進行穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株的篩選。因為是隨機整合,也有不確定因素,有些公司還能提供定點整合技術(shù),將靶基因定點整合到基因組特定的部位,從而保證其高效表達并且對細胞不產(chǎn)生隨機整合可能產(chǎn)生的傷害。
  
  慢病毒載體基因組是正鏈RNA,其基因組進入細胞后,在細胞漿中被其自身攜帶的逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄為DNA,形成DNA整合前復(fù)合體,進入細胞核后,DNA整合到細胞基因組中。整合后的DNA轉(zhuǎn)錄mRNA,回到細胞漿中,表達目的蛋白或產(chǎn)生RNAi干擾。
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